UAB "Biotecha"

Antakalnio g. 36,
10305 Vilnius, Lietuva
tel: +370 5 270 9055 
El. paštas: info@biotecha.lt

Bendroji mikrobiologija

Sterilumo testavimas

Visų sterilių produktų, pagamintų pagal GMP, sterilumas privalo būti testuojamas nuolat. Tačiau ne visi sterilumo testavimo būdai yra lygiaverčiai. Kokybė, patogumas ir tinkamumas gali labai skirtis, įtakodami rezultatų patikimumą. Gauti klaidingai neigiami rezultatai gali būti susiję su užterštų produktų išleidimu bei gali turėti rimtų pasekmių tiek pacientams, tiek gamintojams. Kita vertus, kryžminis užterštumas ir klaidingai teigiami rezultatai reikštų ilgus ir brangius tyrimus, taip pat kaip ir produkto užlaikymą arba atmetimą. Merck siūlo sprendimą sterilumo nustatymui: uždarą membraninio filtravimo sistemą ir platų asortimentą mitybinių terpių bei skalavimo buferių, tinkančių visiems sterilumo nustatymo tyrimams. 

Mikrobiologinis testavimas

Mikrobiologinio užterštumo nustatymas (ang. Bioburden testing) skirtas gyvybingų aerobinių mikroorganizmų, kurie randami žaliavose arba galutiniame produkte, kurie nebuvo sterilizuoti, aptikimui. Bioburden testas atliekamas dviem etapais. Pirmajame kiekybiniame (mikroorganizmų skaičiavimo) etape nustatomas bendras aerobinių mikroorganizmų, taip pat bendrasis mielių ir pelėsių kiekis. Antrajame, kokybiniame (mikroorganizmų aptikimo) etape nustatomas konkrečių mikroorganizmų buvimas ar nebuvimas. Merck siūlo įrangą ir priemones, tokius kaip: membraninio filtravimo moduliai, piltuvėliai, vakuuminiai siurbliai, membraniniai filtrai, filtrų dispenseriai, mitybinės terpės, reagentai ir kt.

Mitybinės terpės

Merck jau dugybę metų gamina aukštos kokybės mitybines terpes, skirtas farmacijos, kosmetikos, maisto ir gėrimų pramonėms. Šioms pramonės šakoms skirtos mitybinės terpės yra: dehidratuotos granuliuotos, paruoštos naudoti skystos, paruoštos naudoti kietos (agarai). Visi produktai atitinka aukščiausius kokybės reikalavimus, turi kokybės sertifikatus bei yra saugūs vartotojams. 

Pirogenų nustatymas – LAL ir MAT testai

PyroDetect yra naujausia pirogenų nustatymo sistema, paremta monocitų aktyvavimo tyrimu (MAT), aprašytu Europos farmakopėjoje (EP skyrius 2.6.30) 2010 m. Naudodama organizmo įgimtą imuninę gynybos reakciją, PyroDetect sistema imituoja žmogaus karščiavimo reakciją geriau nei bet kurio gyvūno pirogenų testas. Mėginyje esantys pirogenai aktyvuoja šaldytame žmogaus kraujyje esančius monocitus, ko pasekoje susidaro citokinai, kurie nustatomi ELISA būdu, naudojant specifinius antikūnus ir fermentines kolorimetrines reakcijas. Monocitų aktyvavimo testas paremtas šaldyto kraujo ir interleukino-1β reakcija. Trys pagrindiniai testo su PyroDetect sistema nustatymo etapai: šaldyto (arba šviežio) kraujo inkubavimas, IL-1β ELISA tyrimas ir duomenų analizė. 

LAL įranga ir reagentai

ACC yra viena didžiausių gamintojų pasaulyje, tiekiančių rinkai produktus, skirtus gramneigiamų bakterijų endotoksinų ir (1→3)-ß-D-gliukanų nustatymui ir kiekybiniam skaičiavimui. Šiuos produktus naudoja pirmaujančios pasaulyje farmacijos ir medicinos prietaisų bendrovės, siekiančios užtikrinti jų gaminamų parenterinių vaistų, biologinių produktų ir medicinos prietaisų saugumą. Taikymo sritys: farmacinių injekcinių preparatų testavimas, žaliavos bei proceso kontrolė, biologinių preparatų kontrolė, dializės vandens testavimas ir kt. 

Limulus Amebocyte Lysate (LAL) testai endotoksinų ir gliukanų nustatymui

Limulus Amebocyte Lysate (LAL) testais galima nustatyti ir kiekybiškai įvertinti gramneigiamų bakterijų išorinės membranos išskirtus endotoksinus. Pagrindinis LAL reagentų komponentas, naudojamas šiuose testuose yra baltymas, dalyvaujantis endotoksinų inicijuoto kraujo krešėjimo mechanizme bei gaunamas iš Atlantinio kardauodegio (Limulus polyphemus) amebocitų lizato ekstrakto. LAL testai yra aprašyti JAV farmakopėjoje (skyrius ) bakterijų endotoksinų nustatymo skyriuje, Europos farmakopėjoje (skyrius 2.6.14) bei Japonijos farmakopėjoje (Bendrieji testai, Nr. 4.01). 

Trys pagrindiniai LAL testavimo metodai

Chromogeninis (spalvinis) metodas. LAL reagentas turi atitinkamą sintetinį substratą, kuriam sureagavus su endotoksinų aktyvuotu baltymu atsiranda geltona spalva. Testas yra skaitomas mikroplokštelių skaitytuvu prie 405 nm bangos ilgio. Gali būti atliekamas galutinio rezultato arba kinetiniu metodu. Maksimalus jautrumas 0,001 EV/ml.

Turbidimetrinis (drumstumo) metodas. Kinetinis metodas, paremtas drumstumo atsiradimu, lizatą paveikus endotoksinais. Drumstumo optinis tankis matuojamas inkubuojančiu mikroplokštelių skaitytuvu arba inkubuojančiu mėgintuvėlių skaitytuvu. Testo jautrumas – 0,001 EV/ml.

Gel-clot (gelio gumulo) metodas. LAL reagentas, paveiktas endotoksinais, suformuoja gelius. Tai pats paprasčiausias metodas. Rezultatai vertinami apverčiant mėgintuvėlį. Maksimalus jautrumas 0,03 EV/ml. Pigiausias metodas – nereikalingas optinis skaitytuvas. Tinka neskaidriems bei spalvotiems pavyzdžiams, suspensijoms.

2018.10.19 18:10 Atspausdinta iš UAB "Biotecha" tinklalapio.
Adress: http://www.biotecha.lt/