Промышленная хроматография

Родственная (аффинная) хроматография основана на родственном взаимодействии белков с лигандами, которые прикреплены (иммобилизованы) к твердому носителю. Этот тип хроматографии является – очень эффективный метод разделения биомолекул. Это металл-хелатная хроматография для разделения соединений, имеющих метку His (матрица очистки белка). Разделение проводится с использованием аффинных лигандов на матрице сорбента. Лиганды могут быть субстратом или коферментом. К лигандам присоединяется только белок. Это взаимодействие специфическое. Все остальные белки попадают в элюат. Родственная (аффинная) хроматография отмечается высокой специфичностью и позволяет очищать выделяемый белок тысячи раз. Сорбенты, имеющие белковую лиганду А, предназначены для очистки моноклональных антител.

Молекулы белка имеют сложную структуру и могут иметь положительный или отрицательный заряд. Наиболее часто используемый метод очистки белка – ионообменная хроматография. Целью этого метода является отделение молекул в зависимости от их поверхностного заряда и функциональных групп. Ионообменная хроматография основана на обменной реакции, которая происходит между ионами исследуемого раствора и подвижными ионами сорбента, пропуская раствор через колонку, заполненную катиононитом или аниононитом. Выбрав подходящие условия хроматографии (напр., концентрации соли, буферная система и pH) можно отделить белки от примесей. Чаще всего на практике связывающие молекулы селективно вымываются в несколько этапов или путем постоянного увеличения концентрации соли. Примеси могут быть связаны сорбентом или с помощью мембранной фильтрации. Сорбенты «Merck» для ионообменной хроматографии: «Fractogel®», «Eshmuno®».

Преимущество метода обращенно-фазовой хроматографии заключается в том, что с его помощью можно быстро и эффективно получать продукты высокой чистоты. Важную роль играют хроматографические препаративные колонки, если для испытаний или производства необходимо очистить дорогостоящие соединения. Если на расширенной стадии нормально- и обращенно-фазовой хроматографии требуется силикагель, рекомендуем использовать «LiChroprep®» неправильной формы или «PharmPrep®» сферической формы – универсальные материалы, обеспечивающие быстрое, эффективное и воспроизводимое отделение. 

В обращенно-фазовой хроматографии очень важно качество используемого сорбента. Одним из наиболее важных факторов является селективность, которая имеет решающее значение при определении качества и повторяемости хроматографического отделения. С неорганическими сорбентами «Merck» вы получите превосходные результаты повторяемости, а узкое распределение частиц по размерам приведет к безупречной разрешающей способности. Это обеспечивает высочайший уровень надежности хроматографического отделения и очистки, выполняемых в лаборатории, малопроизводственной испытательной лаборатории и на производстве.

Очистка белка и окончательная очистка зависят от выбранных хроматографических методов, которые работают вместе, изолируя необходимый белок и удаляя любые оставшиеся примеси. Этот метод основан на том, что материалы с разной молекулярной массой по-разному распределяются между фазами подвижной и неподвижной хроматографической колонки. 

Хроматография гидрофобного взаимодействия является отличным выбором для очистки белка. Этот метод основан на взаимодействии гидрофобных лиганд и гидрофобных групп белковых молекул. Солевой раствор высокой концентрации помогает лучше отделить необходимый белок. 

Хроматография на молекулярных ситах (гель-фильтрация) используется для окончательной очистки белков. К буферному раствору не выставляются высокие требования. Нативные белки, рекомбинантные белки, вирусы и плазма биологического происхождения могут быть легко отделены с использованием хроматографических колонок молекулярных сит.

Правильный выбор хроматографических колонок очень важен для успешного отделения молекул. Второй этап – это загрузка сорбента в колонку, проверка и валидация качества заполнения. Современное решение сегодняшнего дня – это заполненные колонки «Chromabolt®». Эти колонки могут быть стандартными или изготовленными по индивидуальному заказу. Заполненные хроматографические колонки подходят для использования в лаборатории, в испытательном и постоянном производстве небольшого объема. Используя заполненные хроматографические колонки, вы сможете точно управлять своим рабочим временем. Вы больше не будете тратить время на заполнение хроматографических колонок, поэтому вы сможете уделять больше внимания производству продукта. Возможен выбор размеров хроматографической колонки и сочетаний сорбентов.

На каждом этапе производства необходимо обеспечение стабильности и чистоты процесса. Поэтому мы предлагаем такой широкий выбор химических веществ – от солей до концентрированных растворов. Препараты готовы к применению и упакованы в одноразовую упаковку или жесткие пластиковые контейнеры. Продукты «Merck» «EMPROVE® bio» и «EMPROVE® exp» поставляются с полной документацией по обеспечению качества. С продуктами «EMPROVE®» ваша работа будет более быстрой и экономной. 

Практически на каждой стадии процесса биофармацевтического производства используется буфер, поэтому на успех процесса влияет качество используемого буфера. «Merck» поставляет высококачественные буферные материалы, подходящие для всех наиболее часто используемых буферных систем, таких как фосфаты, ацетаты или органические буферы TRIS, HEPES или MES.

При создании производственных задачей является снижение концентрации микробиологического загрязнения и эндотоксинов. Кроме того, неизвестна ферментная активность большинства буферов (ДНКаз, РНКаз или протеаз), хотя это крайне важно для биохроматографии. Для этой цели можно использовать квалификационные комплекты с образцами из трех партий. 

Для очистки промышленных установок в биофармации используется большое количество чистящих средств (CIP). Некоторые компании изготавливают чистящие средства на заказ. Компания «Merck» создала высококачественные продукты для очистки биофармационных промышленных установок и хранения хроматографических сорбентов. К ним относятся сорбенты «Fractogel®» и «ProSep®», а также кассеты «Pellicon®». Все изделия соответствуют самым высоким требованиям чистоты и надежности и эффективно предотвращают загрязнение. Все изделия соответствуют требованиям GMP.